一、原理

在植物组织培养中，原已分化的外植体（根、茎、叶、花、果实、种子、花粉等）细胞、又能重新进行分裂生长，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这个过程称为脱分化。愈伤组织在适当培养条件下分化根和芽的现象称为再分化。植物激素在“再分化”中起重要作用。

愈伤组织（callus）分化根和芽受培养基中生长素和细胞分裂素的相对浓度的影响，生长素/细胞分裂素比值高时，促进根的分化；比值低时，则促进芽的分化；两种激素浓度相等时，则愈伤组织生长占优势或不分化。这样，通过改变两种激素的相对浓度即可有效地调节愈伤组织再分化的进程。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料菊花花蕾。

（二）仪器设备

超净工作台，高压灭菌锅，手术刀，长柄镊子、三角瓶，容量瓶，移液管，培养皿，广口杯，烧杯，酒精灯，牛皮纸，白线绳，培养室。

（三）试剂

（1）75%乙醇。

（2）1%次氯酸钠。

（3）1mol/LHCl。

（4）1mol/LNaOH。

（5）琼脂。

（6）6-苄基腺嘌呤。

（7）萘乙酸。

（8）MS培养基配方（见附录6）中各种无机盐和有机化合物。

三、实验步骤

（一）配制培养基

按MS培养基配方，先配制各母液。1.10倍的大量元素母液见表2-48-1。

用蒸馏水溶解并定容至mL。2.倍的微量元素母液见表2-48-2：

用蒸馏水溶解并定容至mL。3.倍的铁盐母液

4.有机成分

（1）20mg/mL肌醇溶液。称取2g肌醇，用蒸馏水溶解后定容至mL。

（2）0.5mg/mL烟酸溶液。称取12.5mg烟酸，用蒸馏水溶解后定容至25ml.。

（3）1mg/mL甘氨酸溶液。称取25mg甘氨酸，用蒸馏水溶解后定容至25mL。

（4）0.5mg/mL盐酸吡哆醇（维生素Ba）。称取12.5mg盐酸吡哆醇，用蒸馏水溶解后定容至25mL。

（5）0.1mg/ml盐酸硫胺素（维生素Bi）。称取10mg盐酸硫胺素，用蒸馏水溶解后定容至mL。

5.植物激素

（1）0.1mg/mL萘乙酸溶液。称取10mgNAA，用少量95%乙醇溶解后，再用蒸馏水定容至mL。

（2）1mg/mL6-苄基腺嘌呤。称取50mg6-BA，用少量1mol/mL的HCl溶解后，用蒸馏水定容至50mL。

将各种元素的母液混合，配制成MS培养基，其中1L体积中所含剂量见表2-48-3。

再按表2-48-4分别加入NAA和6-BA母液。

先在烧杯（或不锈钢锅）中加入ml蒸馏水及所需的琼脂和糖，在水浴锅里将琼脂溶化，如果直接加热应不停地搅拌，防止瓶底（或锅底）烧焦或沸腾溢出。再将溶解的琼脂糖溶液倒入盛有上述各种物质母液的下口杯中，混匀，用1mol/LNaOH或1mol/LHCI调pH至5.8，用蒸馏水定容至1L。将培养基分注到三角瓶或试管中，按容器的大小和培养要求放入适当量的培养基。分装时注意不要把培养基沾附到瓶口或管口附近的内壁上，以免以后引起污染。分装中还要不时搅动下口杯中的培养基，否则先后分装的各瓶培养基凝固能力不同。塞上棉塞，用牛皮纸扎好后，放入高压灭菌锅，1.2大气压（0.MPa）下灭菌15min，冷却后备用。

（二）材料的灭菌与接种

取开花前2~3d已露白的菊花花蕾，先用自来水冲洗花蕾，然后在75%乙醇中浸泡15s，后用无菌水冲洗2次，再用1%次氯酸钠溶液浸泡15min，并不时轻轻搅动。用无菌水清洗3次，再转入放有滤纸而又无菌的培养皿中，用剪刀剪取舌状花，用解剖刀切取舌状花的5mml大小的小块，一个mL的三角瓶中放6~8个小块。接种后放到培养室中培养。培养室内的温度为25±2℃，日光灯每天照明12h，光照强度约0lx。

四、结果观察和分析

接种后注意观察记录外植体上愈伤组织和根芽出现的时间和数量，加以分析比较。